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單抗制備-細(xì)胞融合篩選過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對(duì)策

 更新時(shí)間:2013-12-31    點(diǎn)擊量:1145

1,融合率低,陽(yáng)性孔少
①免疫的問(wèn)題。由于免疫原性不強(qiáng)或者免疫途徑不當(dāng)造成免疫弱,效價(jià)低。
②融合過(guò)程中溫度、時(shí)間、PEG分子量,作用時(shí)間等。
③脾細(xì)胞是否取出了足夠多的細(xì)胞,有無(wú)組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)是否完好,細(xì)胞是否渾圓,透亮,成對(duì)數(shù)生長(zhǎng)。


2,單抗親和力整體低
①免疫的問(wèn)題。免疫途徑不當(dāng)或者免疫原問(wèn)題。
②融合細(xì)胞篩選過(guò)程出現(xiàn)遺漏,篩選方法不當(dāng)或檢測(cè)方法不當(dāng),造成沒(méi)有篩到高親和力的融合細(xì)胞。
③由于亞克隆細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境不合適,導(dǎo)致融合細(xì)胞染色體丟失,分泌特性改變,親和力從高變低,這時(shí)就需要及時(shí)更換培養(yǎng)液,當(dāng)細(xì)胞增長(zhǎng)到一定密度的時(shí)候,培養(yǎng)基就開(kāi)始變顏色,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失;控制好細(xì)胞的密度,密度過(guò)大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失;不要過(guò)于頻繁操作細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度不是很大的時(shí)候,不要頻繁操作,否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長(zhǎng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
操作細(xì)致,防止細(xì)胞被支原體等微生物污染。

3,抗體親和力從高變低
①?zèng)]有及時(shí)更換培養(yǎng)液,當(dāng)細(xì)胞增長(zhǎng)到一定密度的時(shí)候,培養(yǎng)基就開(kāi)始變顏色,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失或者性狀改變。
②控制好細(xì)胞的密度,密度過(guò)大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng),造成染色體丟失或者性狀改變。
③過(guò)于頻繁操作細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度不是很大的時(shí)候,不要頻繁操作,否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長(zhǎng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
④細(xì)胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數(shù)超過(guò)5次,導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境經(jīng)常被改變,弱的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞染色體丟失或者性狀改變。

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